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恒遠(yuǎn)周五實驗：用TRIzol索取RNA方式步驟全過程

點(diǎn)擊次數(shù)：13027   發(fā)布時間：2014/3/7 10:34:37

     今天到這里為止，還是陽光大好，我們現(xiàn)在來看什么實驗?zāi)�？這是一個TRIzol索取RNA實驗，我公司為朋友們整理出了全方面的過程，除了步驟之外，我們還會講到一些試劑的準(zhǔn)備以及要注意的事項。下面就來看看恒遠(yuǎn)周五實驗：用TRIzol索取RNA方式步驟全過程。

在實驗之前需要準(zhǔn)備好的試劑：
1、TRIzol試劑。
2、氯仿
3、異丙醇
4、75%乙醇（DEPC H2O配制）
5、DEPC H2O
用TRIzol索取RNA方式的七個步驟：
1、樣品處理
① 培養(yǎng)細(xì)胞：收獲細(xì)胞1-5×107，移入1.5ml離心管中，加入1ml Trizol，混勻，室溫靜置5min。
② 組織：取50-100mg組織（新鮮或-70℃及液氮中保存的組織均可）置1.5ml離心管中，加入1ml Trizol充分勻漿，室溫靜置５min。
2、加入0.2ml氯仿，振蕩15s，靜置2min。
3、4℃離心，12000g×15min，取上清。
4、加入0.5ml異丙醇，將管中液體輕輕混勻，室溫靜置10min。
5、4℃離心，12000g×10min，棄上清。
6、加入1ml 75%乙醇，輕輕洗滌沉淀。4℃，7500g×5min，棄上清。
7、晾干，加入適量的DEPC H2O溶解（65℃促溶10-15min）。
上海恒遠(yuǎn)為朋友們整理出的本次實驗中的注意事項：
1、樣品量和Trizol的加入量一定要按步驟（1）的比例，不能隨意增加樣品量或減少Trizol量，否則會使內(nèi)源性RNase的抑制不完全，導(dǎo)致RNA降解。
2、實驗過程必須嚴(yán)格防止RNsae的污染。
總RNA定量
    方法與DNA定量相似。RNA在260nm波長處有的吸收峰。因此，可以用260nm波長分光測定RNA濃度，OD值為1相當(dāng)于大約40μg/ml的單鏈RNA。如用1cm光徑，用 ddH2O稀釋DNA樣品n倍并以ddH2O為空白對照，根據(jù)此時讀出的OD260值即可計算出樣品稀釋前的濃度：
　　RNA（mg/ml）=40×OD260讀數(shù)×稀釋倍數(shù)（n）/1000
    RNA純品的OD260/OD280的比值為2.0，故根據(jù)OD260/OD280的比值可以估計RNA的純度。若比值較低，說明有殘余蛋白質(zhì)存在；比值太高，則提示RNA有降解。
    以上就是實驗的基本過程了，非常感謝您對上海恒遠(yuǎn)的支持！又到周五，是本周的*后一個工作日啦，明天就是婦女節(jié)了，我公司開展了促銷送禮哦！打8.3折還送八折精美小禮物呢，產(chǎn)品需要來電詢我公司葉經(jīng)理哦！

原創(chuàng)作者：上海恒遠(yuǎn)生物科技有限公司

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