大鼠白血病抑制因子試劑盒   大鼠LIF 大鼠elisa試劑盒

產(chǎn)品名稱：大鼠白血病抑制因子試劑盒     

各種種屬：人、大小鼠、豚鼠、兔子、豬、犬、牛、羊…
標(biāo)本齊全：血清、血漿、細胞培養(yǎng)上清液、組織勻漿、組織液、關(guān)節(jié)液、胸腔溢液等…
檢測方法：酶聯(lián)免疫法/酶免法（ELISA）
產(chǎn)品用途：For laboratory use only,Not for drug or other uses.本公司可提供免費代測服務(wù).

試劑：
（1）　包被緩沖液（PH9.60.05M碳酸鹽緩沖液）:
NaHCO３ 1.59克
NaHCO３　2.93克
加蒸餾水至1000ml
（2）  洗滌緩沖液（PH7.4PBS）：0.15M 　　
KH2PO4 0.2克
Na2HPO４·12H2O　2.9克
NaCl　8.0克 　　KCl　0.2克
Tween-20　0.05％　0.5ml
加蒸餾水至1000ml
（3）　稀釋液：
牛血清白蛋白（BSA） 0.1克
加洗滌緩沖液至100ml
或以羊血清、兔血清等血清與洗滌液配成5～10％使用。
（4）　終止液（2M　H２SO４）： 　　
蒸餾水178.3ml，逐滴加入濃硫酸（98％）21.7ml。 　　
（5）　底物緩沖液（PH5.0磷酸棗檸檬酸）:
0.2MNa２HPO４（28.4克／L）25.7ml
0.1M檸檬酸（19.2克／L）　24.3ml
加蒸餾水50ml。
（6）　TMB（四甲基聯(lián)苯胺）使用液:
TMB（10mg／5ml無水乙醇）0.5ml
底物緩沖液（PH5.5）　10ml
0.75％H２O２　32μl
（7）　ABTS使用液:
ABTS　0.5mg 　　
底物緩沖液（PH5.5）　1ml
3％H２O２　2μl
（8）　抗原、抗體和酶標(biāo)記抗體。
（9）　正常人血清和陽性對照血清。

操作步驟：
用于檢測未知抗體的間接法：
用包被緩沖液將已知抗原稀釋至1～10μg／ml，每孔加0.1ml，4℃過夜。次日洗滌3次。
 　　↓ 　　
加一定稀釋的待檢樣品（未知抗體）0.1ml于上述已包被之反應(yīng)孔中,置37℃孵育1小時,洗滌。（同時做空白、陰性及陽性孔對照）
 　　↓ 　　
于反應(yīng)孔中，加入新鮮稀釋的酶標(biāo)第二抗體（抗抗體）0.1ml， 　　37℃孵育30-60分鐘，洗滌,一遍用DDW洗滌。
 　　↓
加底物液顯色：于各反應(yīng)孔中加入臨時配制的TMB底物溶液0.1ml，37℃ 10～30分鐘。
     ↓
終止反應(yīng)：于各反應(yīng)孔中加入2M硫酸0.05ml。
     ↓
結(jié)果判定：可于白色背景上，直接用肉眼觀察結(jié)果：反應(yīng)孔內(nèi)顏色越深，陽性程度越強，陰性反應(yīng)為無色或極淺，依據(jù)所呈顏色的深淺，以“+”、“-”號表示。也可測OD值：在ELISA檢測儀上，于450nm（若以ABTS顯色，則410nm）處，以空白對照孔調(diào)零后測各孔OD值，若大于規(guī)定的陰性對照OD值的2.1倍，即為陽性    
操作步驟：
用于檢測未知抗原的雙抗體夾心法
1.　包被：用0.05MPH9.牰碳酸鹽包被緩沖液將抗體稀釋至蛋白質(zhì)含量為1～10μg／ml。在每個聚苯乙烯板的反應(yīng)孔中加0.1ml，4℃ 過夜。次日，棄去孔內(nèi)溶液，用洗滌緩沖液洗3次，每次3分鐘。（簡稱洗滌，下同）。
2.　加樣：加一定稀釋的待檢樣品0.1ml于上述已包被之反應(yīng)孔中，置37℃ 孵育1小時。然后洗滌。（同時做空白孔，陰性對照孔及陽性對照孔）。
3.　加酶標(biāo)抗體：于各反應(yīng)孔中，加入新鮮稀釋的酶標(biāo)抗體（經(jīng)滴定后的稀釋度）0.1ml。37℃ 孵育0.5～1小時，洗滌。
4.　加底物液顯色：于各反應(yīng)孔中加入臨時配制的TMB底物溶液0.1ml，37℃ 10～30分鐘。
5.　終止反應(yīng)：于各反應(yīng)孔中加入2M硫酸0.05ml。
6.　結(jié)果判定：可于白色背景上，直接用肉眼觀察結(jié)果：反應(yīng)孔內(nèi)顏色越深，陽性程度越強，陰性反應(yīng)為無色或極淺，依據(jù)所呈顏色的深淺，以“+”、“-”號表示。也可測OD值：在ELISA檢測儀上，于450nm（若以ABTS顯色，則410nm）處，以空白對照孔調(diào)零后測各孔OD值，若大于規(guī)定的陰性對照OD值的2.1倍，即為陽性 。
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