工作原理
人高遷移率族蛋白B1（HMGB-1）elisa試劑盒實驗原理
本試劑盒應(yīng)用雙抗體夾心法測定標本中人高遷移率族蛋白 B1（HMGB-1）水平。用純化的人高遷移率族蛋白 B1（HMGB-1）抗體包被微孔板，制成固相抗體，往包被單抗的微孔中依次加入高遷移率族蛋白 B1（HMGB-1），再與 HRP 標記的高遷移率族蛋白 B1（HMGB-1）抗體結(jié)合，形成抗體-抗原-酶標抗體復(fù)合物，經(jīng)過洗滌后加底物 TMB 顯色。TMB 在HRP 酶的催化下轉(zhuǎn)化成藍色，并在酸的作用下轉(zhuǎn)化成*終的黃色。顏色的深淺和樣品中的高遷移率族蛋白B1（HMGB-1）呈正相關(guān)。用酶標儀在 450nm波長下測定吸光度（OD 值），通過標準曲線計算樣品中人高遷移率族蛋白B1（HMGB-1）濃度。
試劑盒組成
1 30 倍濃縮洗滌液 20ml×1 瓶 7 終止液 6ml×1瓶
2 酶標試劑 6ml×1 瓶 8 標準品（320µg/L） 0.5ml×1 瓶
3 酶標包被板 12孔×8 條 9 標準品稀釋液 1.5ml×1 瓶
4 樣品稀釋液 6ml×1 瓶 10 說明書 1份
5 顯色劑A 液 6ml×1 瓶 11 封板膜 2張
6 顯色劑B液 6ml×1/瓶 12 密封袋 1個
標本要求
1．標本采集后盡早進行提取，提取按相關(guān)文獻進行，提取后應(yīng)盡快進行實驗。若不能馬上進行試驗，可將標本放于-20℃保存，但應(yīng)避免反復(fù)凍融
2．不能檢測含NaN3的樣品，因NaN3抑制辣根過氧化物酶的（HRP）活性。
操作流程
人高遷移率族蛋白B1（HMGB-1）ELISA試劑盒操作步驟
1. 標準品的稀釋：本試劑盒提供原倍標準品一支，用戶可按照下列圖表在小試管中進行稀釋。
160µg/L 5號標準品 150µl的原倍標準品加入150µl標準品稀釋液
80µg/L 4號標準品 150µl的5號標準品加入150µl標準品稀釋液
40µg/L 3號標準品 150µl的4號標準品加入150µl標準品稀釋液
20µg/L 2號標準品 150µl的3號標準品加入150µl標準品稀釋液
10µg/L 1號標準品 150µl的2號標準品加入150µl標準品稀釋液
2. 加樣：分別設(shè)空白孔（空白對照孔不加樣品及酶標試劑，其余各步操作相同）、標準孔、待測樣品孔。在酶標包被板上標準品加樣50µl，待測樣品孔中先加樣品稀釋液40µl，然后再加待測樣品10µl（樣品*終稀釋度為5倍）。加樣將樣品加于酶標板孔底部，盡量不觸及孔壁，輕輕晃動混勻。
3. 溫育：用封板膜封板后置37℃溫育30 分鐘。
4. 配液：將30 倍濃縮洗滌液用蒸餾水30 倍稀釋后備用
5. 洗滌：小心揭掉封板膜，棄去液體，甩干，每孔加滿洗滌液，靜置 30 秒后棄去，如此重復(fù)5次，拍干。
6. 加酶：每孔加入酶標試劑50µl，空白孔除外。
7. 溫育：操作同3。
8. 洗滌：操作同5。
9. 顯色：每孔先加入顯色劑A50µl，再加入顯色劑B50µl，輕輕震蕩混勻，37℃避光顯色15分鐘.
10. 終止：每孔加終止液50µl，終止反應(yīng)（此時藍色立轉(zhuǎn)黃色）。
11. 測定：以空白空調(diào)零，450nm波長依序測量各孔的吸光度（OD 值）。 測定應(yīng)在加終止液后15分鐘以內(nèi)進行。
操作程序總結(jié)：


計算
以標準物的濃度為橫坐標，OD 值為縱坐標，在坐標紙上繪出標準曲線，根據(jù)樣品的OD 值由標準曲線查出相應(yīng)的濃度；再乘以稀釋倍數(shù)；或用標準物的濃度與OD 值計算出標準曲線的直線回歸方程式，將樣品的OD值代入方程式，計算出樣品濃度，再乘以稀釋倍數(shù)，即為樣品的實際濃度。
注意事項
人高遷移率族蛋白B1（HMGB-1）ELISA試劑盒注意事項
1．試劑盒從冷藏環(huán)境中取出應(yīng)在室溫平衡 15-30 分鐘后方可使用，酶標包被板開封后如未用完，板條應(yīng)裝入密封袋中保存。
2．濃洗滌液可能會有結(jié)晶析出，稀釋時可在水浴中加溫助溶，洗滌時不影響結(jié)果。
3．各步加樣均應(yīng)使用加樣器，并經(jīng)常校對其性，以避免試驗誤差。一次加樣時間控制在5分鐘內(nèi)，如標本數(shù)量多，推薦使用排槍加樣。
4． 請每次測定的同時做標準曲線，做復(fù)孔。如標本中待測物質(zhì)含量過高（樣本OD 值大于標準品孔孔的OD 值），請先用樣品稀釋液稀釋一定倍數(shù)（n倍）后再測定，計算時請乘以總稀釋倍數(shù)（×n×5）。
5． 封板膜只限一次性使用，以避免交叉污染。
6．底物請避光保存。
7．嚴格按照說明書的操作進行，試驗結(jié)果判定必須以酶標儀讀數(shù)為準.
8．所有樣品，洗滌液和各種廢棄物都應(yīng)按傳染物處理。
9．本試劑不同批號組分不得混用。
儲存方式
人高遷移率族蛋白B1（HMGB-1）ELISA試劑盒保存條件及期
1．試劑盒保存：；2-8℃。
2．期：6個月

更新時間：2024/12/9 9:53:36